液相色谱分析 

方法介绍 

       液相色谱技术是一种功能强大的分离技术，具有高压、高速、高效、高灵敏度的特点。它利用待测物质在固定相和流动相之间保留性质的差异实现样品的分离。在色谱分离过程中，样品在流动相的携带下，在固定相与流动相之间反复吸附与解吸，最终按照保留能力由弱到强的顺序依次从色谱柱上洗脱分离。在色谱柱出口连接适当的检测器，就可以得到横轴为保留时间、纵轴为检测器响应值的色谱图。保留时间是样品从进入色谱柱到离开色谱柱所需要的时间，代表色谱柱对样品的保留能力，是色谱技术对未知物质进行定性分析的依据；色谱检测器检测到的信号强度与化合物含量相关，是色谱技术进行定量分析的依据。高效液相色谱法只要求样品能够溶解在流动相中，不受样品挥发性的限制，流动相可选择水溶液，或者甲醇、乙腈、四氢呋喃等有机溶剂，以适应不同样品的溶解性。液相色谱固定相的种类繁多，通常是以键合硅胶为基础，在其表面修饰C18、C8或氰基等修饰基团，实现对中等极性和弱极性物质的保留和分离。色谱检测器也有多种选择，包括紫外检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器等。质谱是重要的液相色谱的检测器，这就是所谓的液相色谱-质谱（液质）联用技术（LC-MS）。 

       离子色谱是高效液相色谱的一种，又称高效离子色谱（HPIC），其分离原理是离子交换树脂上固定的阴/阳离子基团可以与样品和流动相中电荷相反的溶质离子之间发生可逆交换。待分析离子与离子交换树脂上交换剂的亲和力不同，因此在离子交换柱上保留时间不同，由此实现不同离子的分离。高端离子色谱仪配有淋洗液发生器，可以在线自动生成所需浓度的淋洗液（也就是流动相，通常是一定浓度的KOH或者甲磺酸溶液），离子色谱通常配有电导和安培检测器。适用于亲水性阴、阳离子、氨基酸及糖类物质的分离。

 送样要求： 

      为确保实验结果的准确性，体液（血清、血浆、脑脊液、淋巴液、尿液、唾液、透析液等）样品的建议取样量为100~200 μL，细胞建议提供5×106~1×107个，动物组织建议提供30~200 mg，植物组织建议提供100 mg~1 g，微生物建议提供1×107~1×108个。请尽可能提供详细的参考文献或其他来源的测定方法，以便质谱中心建立样品分析方法。 请尽可能提供详细的被测物及其测定方法信息，包括但不仅限于目标化合物名称、CAS号、结构式、文献或其他来源的测定方法等。 请尽可能提供被测物的标准品，如需质谱中心协助购买标准品，请耐心等待货期。

 实验流程： 

       用户提供血液、组织、细胞和体液样品，加入提取液（80%-100%甲醇或乙腈）后，均质匀浆、超声或振荡提取其中的代谢物。取上清离心后，根据实验目的可以直接对提取液（或其稀释液）进行质谱分析，也可以将提取液浓缩后进行分析，或者使用固相萃取小柱（SPE）对样品进行净化后，再使用液相色谱进行分析。

实验结果： 

      使用内标法或者外标法和质谱仪自带的定量数据分析软件对待测物质的含量进行定量分析，得到待测物在样品中的绝对含量。质谱中心会将实验结果以电子邮件形式发送到用户的注册邮箱中，实验原始数据保存在计算中心数据存储服务器上，用户可以按需下载。